熊胆滴眼液对兔角膜烧伤和角膜翳的治疗实验研究

发布: 2010-04-03 |  作者: 邓旭明,李乾学等 |   来源: 《中兽医医药杂志》

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1.解放军军需大学动科系基础兽医教研室,吉林长春 130062; 2.解放 军军需大学军事兽医研究所

 

      据记载熊胆具有清热、镇痉、明目、杀虫等功效。由于现代手术水平的提高 ,可采用人工引流的方法采取大量熊 胆汁, 使熊胆这一名贵中药在人医临床上得以广泛应用。 熊胆制剂在兽医临床上的应用尚未见报道, 笔者等率先采用熊胆为主药, 辅以冰片、 硼酸 成熊胆滴眼液, 临床上用于治疗犬的各种原发性及继发性眼睑膜炎、 角膜炎及外伤, 1 500余病例观察,治愈率达99%以上。为了客观评价熊 滴眼液的疗效并申报新药证书,特进行了熊胆滴眼液对兔角膜 烧伤和角膜翳人工复制模型的实验治疗研究,现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物   比利时灰兔20只,体重2.02.5 kg,雄性。由解放军军需大学动物室提供。

1.2 药品熊胆滴眼液及去除熊胆但保留其它组分的熊胆眼药水,解放军军需大学动科系基础兽医教研 室研制,含量是1%(以鲜胆粉计算)。熊胆粉系军需大学药源动物研究中心提供。氯霉素眼 药水,沈阳兴齐制药厂生产。盐酸乙基吗啡,苏联制造,由总后药材处仓库领取,分装号: 961022。荧光素滴眼液,由白求恩医科大学第二临床医院购得。致炎液:由巴豆油2 ml,无 水乙醇20 ml,蒸馏水5 ml ,乙醚73 ml混合制成。氢化可的松注射液:扬州制药厂生产。

1.3 角膜烧伤和瘢痕模型的复制 使用电热角膜瘢痕复制器制作家兔角膜烧伤与斑模型。保定家兔,结膜囊 内滴入10%阿托品与5%丁卡因液。待角膜麻醉,瞳孔散开后,以开眼器撑开眼裂将已烧热至1 30 的复制器烧烙头凹置角膜中央,轻压2 s,即成直径9 mm正圆形的角膜烧伤面,视为烧 伤模型。造成角膜翳时,使用氯霉素滴眼液(抗感染),每次一滴,3/d,约11-5个月 后即可形成角膜斑或云翳。取完全形成且大小、厚度符合要求者作实验模型。

1.4 角膜烧伤的治疗 每批取以上方法制备的角膜烧伤家兔8只,随机分为4,每组2只。每组双眼各滴下列药物: 1组滴生理盐水作对照,第2组滴氯霉素眼药水,第3组滴熊胆滴眼液,第4组滴去熊胆滴 眼液,每次一滴,3/d,连续50 d,重复2次。逐日登记角膜烧伤面积(横径×竖径)的变 化、角膜水肿程度、结膜肿胀程度、分泌物多少。一个月后,隔日滴荧光素滴眼液,判断角 膜烧伤是否痊愈(形成翳)。

1.5 角膜翳的治疗  取前述方法制备的角膜翳家兔8只, 随机分为4组, 每组2只, 每组双眼各滴入下列药物: 1组狄奥宁眼药水(1% 2% 3% 4% 5%各滴10 d 60 d), 2组熊胆滴眼液 3组去熊胆眼药水, 4组生理盐水。 每次一滴, 3/d,连续60 d,重复1次。逐日 测量角膜面积,计算面积减少值,记录角膜翳程度(云翳、斑翳或白斑)。

1.6 熊胆滴眼液对角膜翳的治疗作用的扫描电镜观察 用电热角膜瘢痕复制器制作兔角膜烧伤及瘢痕模型。保定实验用兔,用1%丁卡因液滴眼 2次,2/次,间隔10 min;用预热20 min后的电热角膜瘢痕复制器烧烙角膜2 s;氯霉素眼 药水滴眼,3/d1/次,共38 d,至角膜翳形成为止。将制备的角膜翳比利时灰兔12 机分为两组,第1组用生理盐水滴眼作对照,第2组用复方熊胆滴眼液滴眼治疗。3/d1 /次。第一阶段,在滴眼2个月后捕杀取材(对照组与治疗组各3只);第二阶段,在滴眼5 个月后捕杀取材(对照组与治疗组各3只)。将用生理盐水和熊胆滴眼液滴眼后的灰兔活体 眼内滴加2.5%戊二醛固定液5滴,随后断头处死,取其角膜用2.5%戊二醛继续固定90 min 磷酸盐缓冲液漂洗,1%锇酸固定90 min后,磷酸盐缓冲液漂洗,梯度酒精脱水,醋酸异戊 酯置换,临界点干燥,喷金,S-570扫描电镜观察。

2 结果

2.1 角膜烧伤  按上述方案治疗家兔模型4批。角膜炎症消退(荧光素染色不着色),角膜表面洁净、平滑 、光亮、角膜翳形成愈合。比较各组治疗效果,结果见表1

1 熊胆滴眼液与其他制剂治疗角膜烧伤效果比较

组别       治疗眼睛数 40 d治愈数 4050 d治愈数  50 d治愈数 瘢痕性质

1组        16      0     0        16     白斑、化脓

2组        16      3     9        4      斑翳

3组        16      10*   4        2      斑翳

4组        16      2     6        8      斑翳

*第3组与第2、4组相比较,0.01<P<0.01 ),第24组与第1组比较相差显著(P<0.01),第23组与第4组比较相差亦显著(P0.05WTBZ〗)。表明熊胆滴眼液对眼角膜翳的疗效 非常显著。熊胆滴眼液与狄奥宁组有角膜疤痕表面出现浑浊度变小、透明度变大的直径1 mm的圆形小区 域的现象。狄奥宁组结膜与角膜表现为潮红,即有一定的炎症。显微镜下可见到熊胆滴 眼液组角膜翳上皮接近正常,基质层细胞排列整齐,数目减少。

2.2.2 熊胆滴眼液对角膜翳的治疗作用——扫描电镜观察。在S-570扫描电镜下观察、拍照发现,用熊胆滴眼液对比利时灰兔角膜翳治疗2个月后的角膜 上皮细胞呈现更新速率较快的结构像。斑翳周缘处的角膜上皮细胞的形态和表面结构多数细 胞近于正常,少数细胞表面结构具有斑块状窿突、微皱或微绒毛。治疗5个月后的角膜上皮 已可区分出明、暗两种上皮细胞,火山口样结构散在分布,上皮细胞表面的微皱和微绒 毛排列规则细密,偶见个别细胞的微绒毛排列较密,而微皱则较稀疏。对照组(用生理盐水 滴眼25个月后)角膜上皮细胞轮廓不整,细胞表面不具备微皱与微绒毛等超微结构。

3 讨论 本实验用角膜烧伤与角膜翳的家兔动物模型对熊胆滴眼液的治疗效果进行了研究,并分别与 氯霉素眼药水、狄奥宁滴眼液等进行了比较。结果显示,复方滴眼液可缩短角膜烧伤治疗时 间,减轻并发的结膜炎症状,对角膜翳有较明显的缩小面积的作用,其效果优于狄奥宁滴眼 液,且刺激性小。熊胆滴眼液治疗兔角膜翳2个月后,角膜上皮细胞呈现更新速率较快的结 构像,由此表明,角膜翳处的角膜上皮细胞仍处于逐渐修复的过程中;熊胆滴眼液有促进角 膜翳处的角膜上皮细胞新陈代谢和更新的作用。角膜翳周缘处的少数角膜上皮细胞表面具有 斑块状窿突,火山口样结构排列较密,说明受损的角膜上皮在修复过程中,上皮细胞表 面的亚显微结构要经由斑块状窿突逐渐变为规则密集排列的微皱襞和微绒毛,火山口 结构的排列由密变疏的变化过程。治疗5个月后,可区分出明、暗细胞,上皮细胞表面的微 皱襞及微绒毛排列规则、细密,火山口样结构散在分布,这些结构均与正常角膜上皮细 胞的超微结构相一致。由此表明复方熊胆滴眼液具有使角膜翳处的角膜上皮恢复正常的作用 。少量细胞表面的微绒毛排列较密,而微皱襞则较稀疏,可能是尚未完全恢复为正常结构像 的过渡型细胞。熊胆是明目去翳要药,《本草纲目》中载熊胆丸,用以治疗目障翳,效果绝奇”。明代眼科名著《审视瑶函》中治目疾的灵飞散、五胆膏、琼液膏等方中,概以熊胆为主药。现今临床上治疗角膜翳一般多用碘化钾、安妥碘、狄奥宁等药物,促进浑浊 病变的吸收,效果不够理想,不良反应与禁忌症也较多。以熊胆粉制成滴眼剂,不但将传统 的中药丸散变为使用更为方便剂型,而且可为角膜翳等难医眼疾的临床治疗提供一种新的制 剂。本实验结果已表明,熊胆滴眼液确可减小角膜翳的面积,效果比对照的各组均好,且消 炎作用比较明显。

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