雏鸭病毒性肝炎的诊断  续

发布: 2010-04-03 |  作者: 霍翠梅,韦强,鲍国连等 |   来源: 《动物医学进展》

上一篇 下一篇

2.3 琼脂免疫扩散试验

Murty(1961)首次报道采用琼脂扩散试验诊断DHV。通过不同距离、不同浓度的抗原与高免血清沿琼脂带发生的琼扩反应,可用来检测病毒抗原的滴度[16]。许伟琦等试验表明在琼脂中加入2%PEG能加快反映速度。张济培等[13]用琼扩试验检测提纯后的DHV,发现琼脂凝胶配制的最佳方案是pH7.2,NaCl80 g/L和琼脂糖浓渡为10 g/L。琼脂扩散试验虽然简便易行,但准确性存在欠缺,并且有干扰,因此存在着一定的局限性。

2.4 间接血凝试验

司兴奎等[14]报道在纯化DHV获得较为满意结果的基础上,进一步应用纯化抗原进行间接血凝试验(IHA)。孙泉云等[15]将初提DHVSephadex G200柱层析纯化后作为致敏抗原,戊二醛法固定绵羊红细胞,BDB法致敏抗原红血球建立了检测DHV抗体的IHA方法。IHA试验敏感性高,所以致敏用抗原的纯度要求高,而且必须保持良好的免疫活性。还有报道说21日龄前不易检测到IHA抗体[16]。所以对DHV早期诊断不适用。在敏感性和稳定性方面有波动,限制了该方法的推广应用。

2.5 直接荧光抗体检测

Maiborda(1972)报道了快速和准确的诊断方法是接种雏鸭采用直接荧光抗体检测(FA)。用FA确定了北京地区流行的DHVI型。胡清海等用鸭胚细胞做成滴片进行FA检测DHV。刘建[17]采用感染新型鸭肝炎强毒后死亡鸭的肾细胞做滴片进行荧光染色,可检测到病毒抗原存在,为临床上快速诊断新型鸭病毒性肝炎提供了一种检测方法。该方法准确简便,但对设备要求较高。

2.6 斑点免疫金渗滤法

张小飞等[18]用胶体金标记提纯后的兔抗鸭肝炎病毒(DHV)IgG,建立了一种以微孔滤膜为固相载体,以红色胶体金为标记物的检测DHV的斑点免疫金渗滤法(DIGFA,并确定了最佳试验条件。该法既可定性,亦可定量,对纯化DHV的最小检测量为4.12 ng/,其敏感性为抗原斑点试验(AST)2倍。DIGFA 法具有敏感性高、特异性强、重复性好等优点。但其要求较高的抗原纯度,这一点难以达到。

2.7 酶联免疫吸附试验

应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)进行抗原、抗体的检测,比较敏感、快速,已经广泛应用于各种疾病的诊断。

赵新柳等[19]首次建立了间接ELISA法以检测DHV抗体,结果表明,ELISA阳性检出率为100%。陈溥言等[20]报道了DHV单克隆抗体的成功制备,并建立了检测DHV的夹心ELISA方法,随后范伟兴等[21]用单克隆抗体建立了Dot-ELISA检测方法。杨奎等用辣根过氧化物酶标记法成功地检测了DHV抗体。该法与以polyomyl板或polystyrene为固相载体的ELISA法相比,抗原用量少,很适于DHV这类难以提纯的病毒的抗体检测。孙泉云等[15]将单抗的高度特异性与ELISA的高度灵敏性结合起来,建立了用以检测DHV抗体的单抗捕捉法ELISA方法,该法能有效区分阴、阳性血清,非特异性背景很小。同时对抗原的纯度要求也很低,甚至是尿囊液也能克服非特异性反应。杨萍萍等[22]制备了DHV单克隆抗体,并用于检测DHV。马秀丽等[23]用辣根过氧化物酶标记纯化的Ⅰ型DHV单克隆抗体建立了检测DHVDot-ELISA法。

很多学者建立了用以诊断DHVELISA方法,其优点是灵敏度高,操作简便,特异性强。但因病毒的纯化和DHV阴性血清的制备等均存在一定难度,该方法在DVH的检测诊断方面还未能得到广泛的应用。

2.8 其他血清学诊断方法

DVH的诊断上除上述方法外,用来诊断鸭病毒性肝炎的方法还有被动血凝试验,SPA协同凝集试验,胶体金免疫电镜技术,单克隆抗体-PAP法和核酸探针等方法,但因某些原因均还存在一定争议,未能得到广泛推广和应用。

3 小结

尽管多年来国内外很多学者对DHV进行了大量研究,但到目前为止,尚未能摸索出一种便捷的提纯程序,因而至今尚未得到纯化的病毒,这就使病毒的深入研究大受限制,对其分子生物学特性的研究也难以着手。因此,继续进行病毒提纯方法的改进,将显得尤为重要。

对于DHV诊断方法的研究,已经取得了一定的成绩,建立了许多基于血清学的诊断方法,基本能够快速简便地做出实验室诊断,但基层应用存在一定的困难。也有很多学者建立了DHVcDNA文库,但还都有待于验证,并未见公开的DHV序列报道。因此,应加紧其分子生物学研究,明确病毒的核苷酸序列,基因结构,编码蛋白质的方式。用基因工程技术表达的重组抗原,或根据蛋白质分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列。人工合成的多肽片断抗原运用到免疫学检测方法中,或建立一种快速而准确的分子生物学诊断方法,以解病毒是否存在着变异等难题。

TAG: 病毒性肝炎
上一篇 下一篇