兽药厂质检部门微生物室设置探讨

发布: 2010-04-03 |  作者: 佚名 |   来源: 《兽药GMP参考》

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    本文拟就兽药厂质检部门如何设置微生物室问题进行探讨,原料药和生物制品厂的微生物室设置问题不在本文讨论范围。

一、什么情况下兽药厂的质检部门必须设置有关微生物操作的功能区?

通常情况下,如果产品中没有需要微生物检定法进行效价测定的品种,并且车间全部为一般生产区,则不需要设置有关微生物操作的功能区。只生产中药散剂或消毒剂的兽药厂即不必设置无菌室和半无菌室。如果产品中有需要进行抗生素微生物检定法测定效价、无菌检查、微生物限度检查等的品种,则必须设置无菌室和半无菌室。生产区有30万级以上(含30万级)洁净级别要求的兽药厂其质检部门也必须设置有关微生物操作的功能区。

依据是:《兽药生产质量管理规范》第三十条规定:“质量管理部门应根据需要设置检验、中药标本、留样观察以及其它各类实验室,能根据需要对实验室洁净度、温湿度进行控制并与兽药生产区分开。生物检定、微生物限度检定和生物制品检验用强、弱毒操作间要分室进行。”第八十一条规定:“兽药生产企业质量管理部门负责兽药生产全过程的质量管理和检验,受企业负责人直接领导。质量管理部门应配备一定数量的质量管理和检验人员,并有与兽药生产规模、品种、检验要求相适应的场所、仪器、设备。”第八十二条:“质量管理部门的主要职责:……10、定期监测洁净室(区)的尘粒数和微生物数对工艺用水的质量监测;……”。

目前,兽药粉剂生产可以设置在一般生产区,并且设备清洁的最后一次用水可以使用饮用水,因此《兽药典》附录粉剂通则中虽有微生物限度检查的要求,实际情况并不需要检查此项。因而非抗生素类粉剂生产也不需要微生物室。

二、无菌室和半无菌室的设置

l.无菌检查室应按无菌操作区管理,至少应在10000级背景的局部100级超净工作台内进行,不得与生物检定、微生物限度检查、污染菌鉴别和阳性对照试验使用同一实验室。

2.无菌检查室与非无菌操作间共享人流通道时,有无相应的管理措施,如避免在同一时间同时做不同性质的试验;对检品外表面进行取样,看消毒是否达到预期的效果等。

3.微生物限度检查、生物负荷(Ambient loadBioburden)检查可在同一室进行;孢子D值测定、污染菌鉴别和阳性对照试验可在同室进行但应使用不同的LAF操作台;细菌内毒素检查不需要无菌操作条件。这些试验均应有书面规程并有防止污染的措施。

(一)准备室

要求20平方米左右,明亮,通风。准备室内要完成器皿洗涤,培养基配制、分装、包扎、高压灭菌等环节。本室的主要设备及用具有:

1. 100-200升电冰箱 用以贮存易变质、易分解药品及各种母液。

2. 高压灭菌锅。

3. 配合灭菌锅的电炉或煤气炉 手提式灭菌锅宜配用2-2.5千瓦的电炉。

4. 4~6升的不锈钢锅 最适合用的是电饭锅,煮制琼脂培养基很相宜,也可用一铝锅。配用1500W或200W电炉,安装闸刀式开关,比较方便、安全和耐用。

5.洗涤用水槽 1-2个。水槽应较大,最好是内衬白瓷砖的水泥槽,为防止培养皿碰坏,可铺一活动的橡胶板。附有上下水道。

6.大型工作台1-2张,大桌子1-2张。

7.玻璃橱1个,搁架2-3个,用以放置药品、培养瓶等物品。

8.干燥箱(小、中型)1个,用于棉塞、器皿等干热灭菌,器皿等烘干。在烘烤棉塞等易燃物品时,应有专人守候,防止着火。

9.半导体小型酸度测定仪或其它酸度计、pH计等。实际在生产条件下用精密pH试纸测试和调整pH值即可。

10.称量500克、感量0.1克普通天平1架,称量为100克200克、感量0.01克天平1架。

11.培养器皿 工作中使用大量的培养容器,主要根据培养物的生长情况来选用适当形状和大小的容器,以工作方便为原则,并没有太严格的要求。如各种规格的试管,通常以口径20-30毫米,长度以100、150、200毫米的平底试管较为常用。容量50-300毫升的三角烧瓶也较常用。

12.分装培养基的器具。

13.试剂瓶1000毫升、500毫升、250毫升,棕色、白色各5个,100毫升滴瓶10个,100毫升试剂瓶20个。

14.移液管10毫升、5毫升、2毫升、1毫升各若干支。

15.量筒1000毫升、500毫升各2只,100毫升、50毫升、10毫升各若干只。

16.烧杯1000毫升、500毫升、250毫升、150毫升、100毫升各若干只。

17.容量瓶1000毫升、500毫升、250毫升、100毫升各若干只。

18.各式洗瓶刷若干只。
    19.胶手套和线手套若干双,用于洗涤和拿取高压灭菌后热的培养瓶等。

20.大型的塑料果菜篮若干个,洗涤后或未洗的培养容器应比较集中地堆放起来,避免占地太多,影响工作。过去有些实验室使用定做的铁丝筐,因易生锈,并不理想。

(二)无菌室

如果说准备室因工作内容多,处理事物的数量大,在条件许可时面积宜大不宜小,那么无菌操作室却恰好相反了,即在工作方便的前提下,宜小不宜大,宜精细密闭,忌粗陋放散。无菌室是进行无菌工作的场所。要求地面、天花板及四壁尽可能光洁,不易积染灰尘,易于采取各种清洁和消毒措施。如只放置1台超净台,约7-8m22台超净台10-12m2即足够了。无菌室要干爽安静、清洁明亮,在适当的位置吊装紫外线灭菌灯1-2盏,用以经常照射灭菌。无菌室配置拉门,以减少空气的流动。无菌室外应留有缓冲间,进入无菌室前在此更衣换鞋,洗手及处理外界采回准备消毒培养的材料等。缓冲间最好安一盏紫外线灯,用以灭菌。缓冲间面积2㎡多就可以了。墙上设衣帽钩,门边摆拖鞋或设一鞋箱(小盒)。

1.超净台  超净台进风口在背面或正面的下方,金属网罩内有一普通泡沫塑料片或无纺布,用以阻拦大颗粒尘埃,应常检查、拆洗,如发现泡沫塑料老化,要及时更换。除进风口以外,如有漏气孔隙,应当堵严。工作台正面的金属网罩内是超级滤清器,超级滤清器也可更换,如因使用年久,尘粒堵塞,风速减小,不能保证无菌操作时,则可换上新的。

无菌室应定期用75%酒精或2%新洁尔灭抹拭台面和用具,配合紫外线灭菌灯(每次开启 15分钟以上)等等消毒灭菌手段,以使无菌室经常保持高度的无菌状态。紫外线灯,使用前开灯15分钟以上照射灭菌,但凡是照射不到之处仍是有菌的。在紫外线灯开启时间较长时,可激发空气中的氧分子缔合成臭氧分子,这种气体成分有很强的杀菌作用,可以对紫外线没有直接照到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康,在进入操作之前应先关掉紫外线灯,关后十多分钟即可入内。

无菌室内力求简洁,凡与本室工作无直接关系的物品一律不能放入,以利保持无菌状态。

2.小搁架 贮放高压灭菌过、等待接种的培养瓶用的小搁架,一般可设计为高100厘米,宽50厘米,长120厘米,分为4层,每层相间25厘米。用4毫米玻璃作搁板。这架子可以存放许多瓶子,几乎够一个多星期之用。需注意的是刚灭完菌的热瓶子不可直接放到玻璃板上,以防玻璃炸裂,但垫上两层纱布就可有效地防止。纱布和玻璃板都应经常保持清洁。

3.无菌操作用的器具 按每个超净台上的用量计,需酒精灯1只(另备用1只,如有本生灯只需1只);25厘米长的镊子;接种棒;500毫升广口瓶数只,用于存放酒精,可浸泡接种棒等。卧式染片缸或类似的方形玻璃缸1-2个,用于架放灼烧过的用具。

4.无菌水 用1000毫升或500毫升的大三角瓶,盛放2/3体积的纯化水,经半小时的高压灭菌后,放凉备用。视消毒材料的多少,每次需用1-2瓶。无菌水存放时间不宜过长,以1-2周较好,时间长了要重新高压灭菌。

(三)效价室

效价室内应建适当大小的水平边台,常用水浴锅、培养皿、陶瓦盖、牛津杯、钢管投放器、5ml和25ml的吸管、培养箱,备有照明设备。

有了设计良好的实验室和基本设备之后,就应当学习组织培养的操作技术,并在实际工作中经过反复练习而熟练掌握。操作技术虽是手工操作的方法,但是应该知道操作的原理与要领,以保证工作的质量,提高效率。

三、无菌操作注意事项:顾名思义,无菌操作的首要条件就是防止污染。即便使用设备完善的实验室,若实验者粗心大意,技术操作不规范,也会导致污染。

1、培养前准备

在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以避免开始实验后.因物品不全往返拿取而增加污染机会。
    2
、操作区消毒

无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面(拖布要专用).紫外线照射消毒30-50min,超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线,消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置.否则会遮挡射线降低消毒效果。些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。

3、洗手和着装

平时可穿紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时,因整个前臂要伸入箱内,应着长袖的清洁工作服,并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。

4、火焰消毒

在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时,首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作,如安装吸管帽、打开或封闭瓶口等,都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意:金属器械不能在为焰中烧的时间过长,以防退火,烧过的接种环要待冷却后才能蘸取试验菌。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼,因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜,再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时,火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死试验菌。

5、操作

进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便,工作台面上的用品要有合理的布局,原则上应是右手使用的东西放置在右侧,左手用品在左侧,酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性,组织或细胞在未做处理之前,勿过早暴露在空气中。同样,培养液在未用前,不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用,应立即封闭瓶口,直立可增加落菌机会。吸取营养液、菌悬液及其它各种用液时,均应分别使用吸管,不能混用,以防扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作区讲话或咳嗽,以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方,瓶口最易污染,加液时如吸管尖碰到瓶口,则应将吸管丢掉。

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